​过氧化氢酶试验原理 霍乱弧菌过氧化氢酶试验

过氧化氢酶试验原理  霍乱弧菌过氧化氢酶试验

过氧化氢酶试验是一种常用的生物化学分析 *** ，其原理是利用过氧化氢酶这一生物催化剂催化过氧化氢分解反应，生成氧气和水。通过观察气泡释放或者测定反应后产生氧气的量，可以得出被测物质中过氧化氢含量的信息，从而实现检测和分析的目的。该试验广泛应用于医学、食品、环保等领域，具有操作简便、灵敏度高、检测速度快等特点。

一：过氧化氢酶试验原理

过氧化氢酶的活性测定——紫外吸收法

【原理】

H2O2在240nm波长下有强烈吸收,过氧化氢酶能分解过氧化氢,使反应溶液吸光度(A240)随反应时间而降低.根据测量吸光率的变化速度即可测出过氧化氢酶的活性.

【仪器与用具】

紫外分光光度计；离心机；研钵；250ml容量瓶1个；0.5ml刻度吸管2支,2ml刻度吸管1支；10ml试管3支；恒温水浴；

【试剂】

0.2mol/L pH7.8磷酸缓冲液（内含1%聚乙烯吡咯烷酮）；

0.1mol/L H2O2（用0.1mol/L高锰酸钾标定）.

【 *** 】

1.酶液提取：称取新鲜小麦叶片或其它植物组织0.5g置研钵中,加入2～3ml 4℃下预冷的pH7.0磷酸缓冲液和少量石英砂研磨成匀浆后,转入25ml容量瓶中,并用缓冲液冲洗研钵数次,合并冲洗液,并定容到刻度.混合均匀将量瓶置5℃冰箱中静置10min,取上部澄清液在4000rpm下离心15min,上清液即为过氧化氢酶粗提液.5℃下保存备用.

2.测定：取10ml试管3支,其中2支为样品测定管,1支为空白管,按表40-2顺序加入试剂.

表40-2 紫外吸收法测定H2O2样品液配置表

管 号

S1

S2

S3

粗酶液(ml)

0.2

0.2

0.2

pH7.8磷酸(ml)

1.5

1.5

1.5

蒸馏水(ml)

1.0

1.0

1.0

25℃预热后,逐管加入0.3ml 0.1mol/L的H2O2,每加完一管立即记时,并迅速倒入石英比色杯中,240nm下测定吸光度,每隔1min读数1次,共测4min,待3支管全部测定完后,按下式计算酶活性.

3.结果计算：

以1min内A240减少0.1的酶量为1个酶活单位（u）.

过氧化氢酶活性(u/gFW/min)=

式中 A240 = AS0－

AS0—加入煮死酶液的对照管吸光值；

AS1, AS2—样品管吸光值；

Vt—粗酶提取液总体积（ml）；

V1—测定用粗酶液体积（ml）；

FW—样品鲜重（g）；

0.1—A240每下降0.1为1个酶活单位（u）；

t—加过氧化氢到最后一次读数时间（min）.

二：细菌过氧化氢酶试验

触酶实验也叫做触媒实验或者过氧化氢酶实验，一般用来鉴别细菌的类型。

（1）原理：具有过氧化氢酶的细菌，能催化过氧化氢生成水和新生态氧，继而形成分子氧出现气泡。

（2）试剂：3％过氧化氢溶液。

（3） *** ：取槽置于洁净的试管内或玻片上，然后加3％过氧化氢数滴；或直接滴加3％过氧化氢于不含血液的细菌培养物中，立即观察结果。

（4）结果：有大量气泡产生者为阳性。不产生气泡者为阴性。

三：乳酸菌过氧化氢酶试验

在谈及抗氧化时，恐怕很多人都会联想起一张流传广泛的苹果图：果肉的表面因为氧化而“生锈”了。

其实，谈及化妆品时，我们所说的“抗氧化”所针对的目标并不是将苹果变黄的空气中的氧，而是氧化自由基。

细胞中的线粒体在燃烧葡萄糖制造能量的过程中会生产自由基，但由于人体本身自带对抗自由基的机制，所以一般情况下，自由基伤害不到细胞其他部位。

但随着人体的自然衰老，这套机制可能变得迟缓而缺乏效率，导致自由基肆虐，攻击DNA和蛋白质。

此外，在紫外线的强力作用下，皮肤中也会生成过量的自由基，导致多种皮肤问题。

在上述这些情况下，就需要使用含抗氧化成分的化妆品来加强皮肤抵抗自由基的能力。

化妆品中使用的抗氧化成分，很多本身就是人体自带的，是人体抗氧化机制中的一员。如维生素C、维生素E、SOD（超氧化物歧化酶）、谷胱甘肽和泛醌（辅酶Q10）等。

除了这些基础经典的抗氧化成分，还有一些成分虽然不是人体自身抗氧化系统的一员，但也被证明有良好的对抗自由基的效果。

如植物提取物——植物多酚、白藜芦醇和近年来大热的碧萝芷；

人工合成抗氧化剂——EUK-134和LIPOCHROMAN；

此外，麦角硫因、虾青素和富勒烯虽然价格昂贵，但也越来越受到重视。

另外，像烟酰胺这类成分，虽然不直接参与对抗自由基，但由于其会参与人体内抗氧化成分的合成，所以对于抗氧化也有一定的效果。

传统抗氧化成分

维生素C和维生素E

维生素C又称抗坏血酸，是人体所需但又没办法自己合成的一种物质，只能通过摄入果蔬来获取（高维生素C的食物包括番茄、土豆和柑橘类水果，例如橙子和柠檬）。维生素C会用自我牺牲的方式直接攻击氧化自由基，具有良好的抗氧化性能。

维生素C的起效浓度在5%左右，浓度超过20%再增加浓度效果也没有太明显的提升。

达到一定浓度之后，维生素C不仅不能起到抗氧化作用，还会反过来变成一个促进自由基产生的促氧化剂。

由于精纯维生素C具有一定 *** 性，不建议大家直接从高浓度维生素C产品开始使用，最好先使用低浓度的产品，建立起皮肤耐受后，再逐渐加大用量。

由于维生素C极易氧化，所以使用维生素C期间要更加注意防晒，帮助维生素C发挥最大的护肤价值。

另外，由于原型维生素C的稳定性欠佳，又具有一定的 *** 性，所以在护肤品中也常使用维生素C的各种衍生物，它们在效果方面可能不如原型维生素C见效快，但在稳定性和温和性方面都会有相应提升。

在化妆品中，维生素E和维生素C经常协同使用，以增强产品的抗氧性能。

维生素E又叫生育酚，和维生素C一样，也能直接对抗自由基。有实验表明，在紫外线照射之前涂抹维生素E，能有效减少UVA对皮肤的伤害。但由于稳定性欠佳，维生素E很少单独支撑一个抗氧化产品，而往往和包括维生素C在内的其他成分协同使用。

植物提取物

植物多酚

多酚类成分在清除自由基方面都有很好的性能，植物类多酚在护肤品中使用也很广泛，其中最为常见的有茶多酚和葡萄多酚等。

葡萄多酚性质温和，它的抗氧化性能在植物多酚中也比较靠前。

另外，葡萄多酚还含有很多种类的有效成分，比如原花青素、白藜芦醇、儿茶素等，所以其功能也非常广泛，比如抗氧化、清除自由基、抗炎、抗真菌等。绿茶多酚在抗氧化产品中也比较常见，但和葡萄多酚一样，更多是和其他抗氧化成分一起复配，协同出力。

在使用上，这类植物提取的抗氧化剂一般没有维生素C那样的强 *** 性，没有建立耐受的麻烦。不过消费者在购买时要仔细甄别，排除概念添加的情况。

人工合成抗氧剂

EUK-134

EUK-134是人工合成的化学物质，模仿的是体内SOD酶和过氧化氢酶工作的原理，它不像维生素C和维生素E那样需要自我牺牲，它在消灭完自由基后自身还能保持良好的稳定性，故而可以循环工作，具有极高的使用效率，只需要0.5%的添加量，就能达到非常好的抗氧化效果。

另外，由于分子量比较小，EUK-134还具有良好的透皮吸收性，更能够进入细胞深层。

除了配合其他抗氧化剂之外，市面上现在也有配方单纯的EUK-134精华，在添加量足够的情况下，产品对抗自由基的能力应该没有问题，但它在肤感上可能要差很多，大家可以自行判断选择。

除了上述介绍的这些成分之外，有效的抗氧化成分还有很多。

需要提醒大家注意的是，抗氧化成分有脂溶性和水溶性之分。脂溶性抗氧化成分一般在亲脂性的环境（比如细胞膜的脂质双分子层）里清除自由基，而水溶性抗氧化成分则一般在亲水性环境（比如细胞膜外面的水溶液）里进行工作。

前者有维生素E、脂溶性维生素C衍生物、辅酶Q10和它的衍生物艾地苯，后者包括维生素C和水溶性维生素C衍生物、烟酰胺、谷胱甘肽、茶多酚以及麦角硫因等。

还有一类抗氧化成分没有明确的“倾向”，它们既具有水溶性部分，也具有脂溶性部分，比如虾青素、阿魏酸和白藜芦醇等。

在挑选抗氧化产品时，最好挑选多种抗氧化成分搭配，既具有脂溶性成分、又具有水溶性成分的产品，全方位、全环节协同抗氧化。